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Tipo do documento: Dissertação
Título: Oligodeoxinucleotídeos CpGs protegem Jundiás (Rhamdia quelen) do desafio por Aeromonas hydrophila
Título(s) alternativo(s): CpGs Oligodeoxynucleotides protect Jundiás (Rhamdia quelen) from challenge by Aeromonas hydrophila
Autor: Canova, Raissa 
Primeiro orientador: Kreutz, Luiz Carlos
Resumo: Neste estudo nós descrevemos a utilização de diferentes CpGs ODNs na modulação do sistema imune natural de jundiás (Rhamdia quelen). Os CpGs ODNs 1668, 2102, 2133 e 2143 foram selecionados devido a suas características e efeitos imunológicos já avaliados em outras espécies de vertebrados, incluindo peixes. Para avaliar o efeito protetor dos CpGs ODNs, grupos de peixes foram inoculados intraperitonealmente (i.p.) com cada um dos CpGs ODNs e posteriormente inoculados i.p. com Aeromonas hydrophila (2×108 UFC/peixe). O efeito imunoprotetor foi avaliado mensurando-se bacteremia e mortalidade nos peixes inoculados. No primeiro experimento, os jundiás foram divididos em 5 grupos (40 peixes/grupo) e cada peixe recebeu um inóculo de 0.1ml de um CpG ODN (0.5¿g/peixe) e o grupo controle recebeu 0.1ml de PBS. Após 24 horas da administração dos CpGs ODNs ou de PBS, os peixes foram desafiados com A. hydrophila (2×108 UFC/peixe; 0,1 ml). E, 24 h após a inoculação com A. hydrophila, amostras de sangue de pelo menos 10 peixes foram coletadas visando a recuperação bacteriana. Os demais peixes inoculados (n=30) foram monitorados e o número de peixes mortos diariamente foi anotado por 7 dias. Neste experimento, os peixes inoculados com CpG ODN 1668, 2102 e 2133 apresentam bacteremia significativamente menor (p<0.05) do que o grupo inoculado com CpG ODN 2143 ou grupo controle. No grupo de peixes inoculados com CpG ODN 1668, o percentual de peixes com bacteremia foi de apenas 50% enquanto que no grupo inoculado com CpG ODN 2102 o percentual de peixes com bacteremia foi de 92%. Nos demais grupos o percentual de peixes com bacteremia foi de 100%. Além disso, os peixes inoculados com CpG ODN 1668 apresentam taxa de sobrevivência de 95%, que foi significativamente superior (p < 0.05) em relação aos demais grupos, inclusive do grupo controle. Os demais experimentos foram feitos utilizando-se o CpG ODN 1668. E, para avaliar o efeito da dose do CpG ODN 1668, quatro grupos de peixes (10 peixes/grupo) foram inoculados com CpG ODN nas doses 0.004¿g, 0.02¿g, 0.1¿g e 0.5¿g por peixe, respectivamente. O grupo controle foi inoculado com PBS e o desafio com A. hydrophila e a coleta de sangue foi feita conforme descrito acima. Nesse experimento, os peixes inoculados com as doses de 0.1¿g/peixe e 0.5¿g/peixe apresentam bacteremia significativamente menor (p < 0.05) do que os peixes do grupo controle. Nestes dois grupos o percentual de peixes com bacteremia foi de 45% enquanto que no grupo controle o percentual de peixes com bacteremia foi de 88,7%. Para avaliar o efeito do tempo de administração do CpG ODN na bacteremia, o CpG ODN 1668 (0.5¿g/peixe) foi administrado nos tempos de 7 dias, 96, 48 ou 24 h antes do desafio com A. hydrophila (2 × 108 UFC/peixe). O grupo controle recebeu PBS antes do desafio. A detecção da bactéria no sangue foi feita conforme descrito acima. Neste experimento, os peixes inoculados com CpG ODN 1668 96 h antes do desafio apresentam bacteremia significativamente menor (p<0.05) em relação aos demais grupos. Além disso, nos peixes inoculados com CpG ODN 96h antes do desafio, o percentual de peixes com bacteremia foi de 80% enquanto que nos demais grupos o percentual de bacteremia foi de 100%. Com este estudo nós concluímos que a administração intraperitoneal de CpGs ODNs em jundiás estimula mecanismos que conferem proteção ao desafio por Aeromonas hydrophila, diminuindo a bacteremia e aumentando a taxa de sobrevivência dos peixes. Nossos dados sugerem que o efeito protetor do CpG ODN nos jundiás é dependente da sequência de nucleotídeos, da dose e do tempo em que o CpG ODN foi administrado aos peixes.
Abstract: In this study we evaluated the effect of different CpGs ODN on their ability to modulate the innate immune system of silver catfish (Rhamdia quelen). The CpGs ODNs 1668, 2102, 2133 and 2143 were selected based on their characteristics and because their immunological effect has already been reported in other vertebrate species, including fish. To evaluate the protecting effect of CpGs ODNs, groups of fish were intraperitoneally inoculated (i.p.) with each CpGs ODNs and 24h after they were i.p. inoculated with Aeromonas hydrophila (2×108 UFC/fish). The protective effect was evaluated by recovering the bacteria from blood and fish mortality. In the first experiment, silver catfish were divided in 5 groups (40 fish/group); each fish was inoculated with 0.1ml of CpG ODN (0.5g/fish) and fish from the control group were inoculated with 0.1 ml of PBS. Then, 24h after CpGs ODNs or PBS inoculation, all fish were inoculated with A. hydrophila (2×108 CFU/fish; 0,1 ml). And, 24 h post-challenge with A. hydrophila, blood samples were collected from at least 10 fish per group aiming to detect bacteremia. The remaining fish (n=30) were monitored and the number of death fish was daily annotated for up to seven days. In thisexperiment, fish inoculated with CpG ODN 1668, 2102 and 2133 had significantly lower (p<0.05) bacteremia than fish from the CpG ODN 2143 or control group. In the CpG ODN 1668 group, the percentile of fish with bacteremia was only 50% whereas in the CpG ODN 2102 group, the percentile of fish with bacteremia was 92%. In the other groups the percentile of fish with bacteremia was 100%. In addition, in the group inoculated with CpG ODN 1668, the survival (95%) and significantly higher (p<0.05) when compared to the other groups. Thus, the remaining experiments were carried out using CpG ODN 1668. And, to evaluate the effect of the dose of CpG ODN 1668, 4 groups of fish (10 fish/group) were inoculated with 0.004μg, 0.02μg, 0.1μg or 0.5μg/fish, respectively. Control group received PBS; bacteria challenge and recovery from blood was performed as described above. Here, fish inoculated with 0.1g and 0.5g of CpG ODN had significantly lower (p<0.05) bacteremia than fish from the control group. In this 2 groups, the percentile of fish with bacteremia was 45% compared to 88,7% of fish with bacteremia in the control group. To evaluate the effect of time of CpG ODN administration on the level of bacteremia, CpG ODN 1668 (0.5 g/fish) was inoculated at 7 days, 96, 48 or 24h prior to A. hydrophila challenge (2 × 108CFU/fish). The control group was inoculated with PBS prior to challenge and bacteria recovery from blood was carried out as indicated above. In this experiment, fish inoculated with CpG ODN 1668 at 96h prior to challenge had significantly (p<0.05) lower bacteremia compared to the other groups. In addition, in the fish inoculated with CpG ODN at 96h prior to challenge, the percentile of fish with bacteremia was 80% whereas in the remaining groups the percentile of fish with bacteremia was 100%. Thus, with these studies we concluded that i.p. inoculation of CpGs ODNs stimulates protection against challenge with A. hydrophila in silver catfish, reducing bacteremia and increasing fish survival rate. Our data suggest that the protective effect of CpG ODN depends on the nucleotide sequence, dose and time of administration prior to fish challenge.
Palavras-chave: Jundiá
Reações antígeno-anticorpo
Peixe
Pesquisa
Sistema imunológico
Área(s) do CNPq: CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Universidade de Passo Fundo
Sigla da instituição: UPF
Departamento: Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária – FAMV
Programa: Programa de Pós-Graduação em Bioexperimentação
Citação: CANOVA, Raissa. Oligodeoxinucleotídeos CpGs protegem Jundiás (Rhamdia quelen) do desafio por Aeromonas hydrophila. 2016. 47 f. Dissertação (Mestrado em Bioexperimentação) - Universidade de Passo Fundo, Passo Fundo, RS, 2016.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: http://tede.upf.br/jspui/handle/tede/1593
Data de defesa: 5-Aug-2016
Appears in Collections:Programa de Pós-Graduação em Bioexperimentação

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