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dc.creatorKirsten, Karina Schreiner-
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/9891204497613621por
dc.contributor.advisor1Kreutz, Luiz Carlos-
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/6207090944092820por
dc.date.accessioned2019-01-03T11:49:48Z-
dc.date.issued2016-07-14-
dc.identifier.citationKIRSTEN, Karina Schreiner. Atrazina reduz a expressão de genes imunológicos em peixes. 2016. 43 f. Dissertação (Mestrado em Bioexperimentação) - Universidade de Passo Fundo, Passo Fundo, RS, 2016.por
dc.identifier.urihttp://tede.upf.br/jspui/handle/tede/1596-
dc.description.resumoO Jundiá (Rhamdia quelen) é um peixe comumente encontrado em rios e lagos da América do Sul e possui diversas características favoráveis ao cultivo intensivo em mono ou policultivo. No sul do Brasil, em muitas áreas vicinais à piscicultura, ocorre um amplo uso de defensivos agrícolas, principalmente herbicidas, que contaminam as águas e prejudicam a produção de peixes. A exposição de peixes ao herbicida atrazina causa uma série de alterações, inclusive no sistema imune. O funcionamento do sistema imunológico depende da interação entre diversos tipos de células e é orquestrado por citocinas, as quais desempenham um papel primordial na resposta imune. Além disso, enzimas produzidas por células fagocíticas, como a mieloperoxidase, são fundamentais para a eliminação de diversos microrganismos. Nesse contexto, a análise da expressão de genes relacionados ao sistema imunológico é importante para estabelecer quais as vias moleculares envolvidas nas alterações observadas no sistema imune de peixes expostos à produtos químicos. Neste estudo, o principal objetivo foi avaliar a expressão de genes imunológicos, por meio da reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa (RT-qPCR), em jundiás expostos a atrazina. Os primers foram selecionados a partir de comparações com espécies de peixes de maior similaridade filogenética com o Rhamdia quelen. Foram selecionados primers para os genes de expressão endógena ¿-actina e RNA18s e para os genes imunológicos Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-¿), Interleucina 1 beta (IL-1¿), IRAK4, Mieloperoxidase e Mx. Para a avaliação da expressão gênica in vivo, os peixes foram distribuídos em três tanques, um grupo controle sem adição de produtos químicos, e dois grupos contendo concentrações de 0,102 mg/L e 1,02 mg/L de atrazina, correspondente à 1% e 10% da CL50-96h, respectivamente. Os peixes foram capturados após 48 h após para remoção do rim, purificação dos leucócitos mononucleares, extração de RNA e avaliação da expressão gênica. Para a avaliação da expressão gênica in vitro, os leucócitos mononucleares isolados do rim de três Jundiás saudáveis foram cultivados e expostos a concentrações de 1 e 10 ¿g/ml de atrazina por 24 horas. Células não expostas a produtos químicos e expostas somente ao solvente foram utilizadas como controles. Na avaliação in vivo, os níveis de mRNA dos genes Mieloperoxidase e IL-1¿ estavam significativamente reduzidos (p < 0.05) nos peixes expostos a 1,02 mg/L de atrazina. A expressão gênica do TNF-¿ estava reduzida nos dois grupos expostos a atrazina. Não houve alteração significativa dos níveis de mRNA dos genes Mx e IRAK4. Na avaliação in vitro, a expressão do gene da mieloperoxidase e IRAK4 encontraram-se significativamente reduzidos no grupo exposto a 10 ¿g/ml de atrazina. A expressão gênica do TNF-¿ estava significativamente reduzida no grupo exposto a 1 ¿g/ml de atrazina. Nos genes IL-1¿ e Mx não houve alteração significativa dos níveis de mRNA. De forma geral, os resultados dos experimentos in vivo e in vitro foram similares. Com este estudo nós demonstramos que a atrazina causa redução da expressão de genes fundamentais para a regulação da resposta imune e que isso possivelmente está relacionado com a redução da capacidade de defesa dos peixes frente ao desafio com patógenos presentes no meio aquático.por
dc.description.abstractSilver catfish (Rhamdia quelen) is ubiquitously distributed in South American rivers and lakes and adapts easily to intensive farming either alone or comingled to other fish species. In South Brazil, fish farming ponds are vicinal to agricultural areas where intensive agrichemical usage, mainly herbicides, supports crop production but ends up as water and soil contaminant. Fish exposure to atrazine-based herbicides might cause deleterious effect on several physiological and biochemical pathways including those related to the immune system. The functioning of immune system relies on cell-to-cell interactions that are mainly orchestrated by cytokines which, in turn, are major players of the immune response. In addition, enzymes produced by phagocytic cells, such as myeloperoxidase, are fundamental to get rid of invading microorganisms. In this scenario, the capability to evaluate the expression of immune system related genes is needed mainly to establish molecular pathways related to the alterations observed in the immune system of agrichemicals-exposed fish. Thus, in this study, our main goal was to evaluate the expression of selected immunological genes, by real time polymerase chain reaction (RT-qPCR), in fish exposed to atrazine. Primers for the immune related genes were designed by comparing the target genes from several fish species phylogenetically related to Rhamdia quelen. We selected primers for β-actin and 18s RNA gene, that were used as control genes, and for Tumor Necrosis Factor alfa (TNF-α), Interleukin 1 beta (IL-1β), IRAK4, myeloperoxidase and Mx genes. To evaluate gene expression in vivo, fish were equally distributed in three tanks, a control group without any chemical, and two additional tanks containing each 0,102 mg/L and 1,02 mg/L of atrazine that corresponded to 1% and 10% of the atrazine CL50-96h, respectively. Fish were captured 48h post-exposure to remove the cranial kidney from which mononuclear leukocytes were isolated and submitted to total RNA extraction. In vitro gene expression was evaluated in mononuclear leukocytes, isolated from three healthy fish, cultivated for 24h with media containing 1 and 10 µg/ml of atrazine. Leukocytes exposed only to the agrichemical solvent, cultivated under the same conditions, were used as controls. In the in vivo experiment, the expression of myeloperoxidase and IL-1β genes were significantly reduced (p<0.05) in fish exposed to 1,02 mg/L of atrazine but the expression of TNF-α was reduced in both atrazineexposed groups.The expressions of Mx and IRAK4 genes were not altered. In the in vitro experiment, however, the expression of mieloperoxidase and IRAK4 were significantly reduced (p<0.05) in leukocytes exposed to 10 µg/ml of atrazine and the expression of TNF-α was significantly reduced in cells exposed to 1 µg/ml of atrazine. The expression of IL-1β and Mx was not altered in the in vitro experiment. In general, the result obtained from the in vivo and in vitro experiments were similar. With this study we demonstrated that atrazine causes reduction in the expression of several genes fundamental to immune response regulation which, in turn, could possible explain the reduction of fish defense mechanisms toward challenging pathogens commonly found on the aquatic environment.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Mariana Freitas (marianafreitas@upf.br) on 2019-01-03T11:49:48Z No. of bitstreams: 1 2016KarinaSchreinerKirsten.pdf: 775452 bytes, checksum: 29b9f81397b454d92bf7016a60ded1ed (MD5)eng
dc.description.provenanceMade available in DSpace on 2019-01-03T11:49:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016KarinaSchreinerKirsten.pdf: 775452 bytes, checksum: 29b9f81397b454d92bf7016a60ded1ed (MD5) Previous issue date: 2016-07-14eng
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESpor
dc.formatapplication/pdf*
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade de Passo Fundopor
dc.publisher.departmentFaculdade de Agronomia e Medicina Veterinária – FAMVpor
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.initialsUPFpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Bioexperimentaçãopor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.subjectPeixepor
dc.subjectCriaçãopor
dc.subjectSistema imunológicopor
dc.subjectHerbicidaspor
dc.subjectPeixepor
dc.subjectEvoluçãopor
dc.subject.cnpqCIENCIAS AGRARIAS::AGRONOMIApor
dc.titleAtrazina reduz a expressão de genes imunológicos em peixespor
dc.title.alternativeAtrazine reduces the expression of immunological genes in fisheng
dc.typeDissertaçãopor
Appears in Collections:Programa de Pós-Graduação em Bioexperimentação

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