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dc.creatorDidoné, Dielli Aparecida-
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/9644447290770083por
dc.contributor.advisor1Grando, Magali Ferrari-
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/7254787776404840por
dc.date.accessioned2018-05-11T19:31:00Z-
dc.date.issued2015-03-31-
dc.identifier.citationDIDONÉ, Dielli Aparecida. Regeneração in vitro e condições de co-cultivo na transformação de embriões imaturos de milho via agrobacterium tumefaciens. 2015. 119 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia) - Universidade de Passo Fundo, Passo Fundo, RS, 2015.por
dc.identifier.urihttp://tede.upf.br/jspui/handle/tede/1299-
dc.description.resumoInúmeros estudos de manipulação e melhoramento genético vêm sendo realizados no milho, sendo a técnica de Agrobacterium tumefaciens preferida para a transferência de genes. No entanto, esta técnica necessita de um sistema de transformação e de regeneração de plantas bem ajustados, pois o gene geralmente é introduzido ao nível de células totipotentes que devem dar origem a plantas completas e férteis. Os experimentos relatados neste trabalho se dedicaram a examinar a capacidade de regeneração in vitro e a transformação genética de embriões zigóticos imaturos de milho via A. tumefaciens. Na primeira parte são relatados experimentos investigando a capacidade de regeneração do hibrido de milho H3MT- 2 e otimização da regeneração de plantas do híbrido Hi-II utilizando meio de pré-regeneração. A segunda parte relata a transformação transiente de embriões zigóticos imaturos do hibrido Hi-II e da variedade BR 451 transformados com A. tumefaciens em diferentes períodos e temperaturas de co-cultivo. Foi verificado o período ideal para realização do teste histoquímico de GUS para obtenção da frequência de transformação transiente. Como resultado, foi observado que a etapa de pré-regeneração é fundamental na regeneração de plantas do genótipo Hi-II. Para este genótipo, o meio de pré-regeneração contendo 0,25 mg.L1 de 2,4-D foi o mais eficaz na conversão de embriões somáticos em plantas (410 plantas a partir de 2,5 gramas de calos embriogênicos iniciais) acelerando também o processo de regeneração em duas semanas. O genótipo H3MT-2 não respondeu positivamente aos tratamentos e sistema de regeneração utilizados. A realização do teste histoquímico de GUS após cinco dias da infecção permite melhor acesso aos indicativos da transformação transiente do que após três dias. A frequência de transformação transiente para o genótipo Hi-II foi, em média, 71,8%, não sendo influenciada pelos tratamentos de co-cultivo. No entanto, para o genótipo BR 451 a condição de co-cultivo cinco dias a 20 ºC proporcionou uma frequência superior de transformação transiente (73,3%). A transferência do T-DNA pela bactéria foi favorecida pelo co-cultivo dos embriões imaturos por cinco dias a 20 ºC, em ambos os genótipos, pois resultou num maior número de pontos azuis por embriões somáticos. A transformação estável avaliada através do número de calos resistentes ao herbicida e portadores do gene bar, foi de 0,39% para o genótipo Hi-II. Os eventos de transformação estável foram observados somente a partir de co-cultivo realizado com 20 ºC. Foi possível otimizar a transformação transiente para os dois genótipo estudados.por
dc.description.abstractNumerous studies of genetic engineering and genetic improvement have been carried out with this cereal and theAgrobacterium tumefaciens preferred technique for gene transfer. However, this technique requires a transformation and regeneration plant system adjusted since the gene is generally introduced to the level of totipotent cells which gives rise to whole, fertile plants. The experiment reported in this paper is devoted to examine the in vitro regeneration capacity and the genetic transformation of immature zygotic embryos of maize via A. tumefaciens. In the first part are reported experiments evaluating the regenerative capacity of the H3MT-2 hybrid of maize and the adaptation and optimization of plant regeneration from Hi-II genotype in the LBV-UPF. The second part reports the transient expression of immature zygotic embryos of the variety BR 451 and the hybrid Hi-II transformed with A. tumefaciens at different periods and temperatures of co-cultivation. yo verify the ideal time to perform the GUS histochemical assay after infection to access the frequency of transient transformation. As results, it was observed that the pre-regeneration step proved to be crucial in plant regeneration of Hi-II genotype. For this genotype, the pre-regeneration medium containing 0.25 mg.L-12,4-D was shown to be more effective in the conversion of somatic embryos into plants (410 plants from the initial 2.5 g of embryogenic callus) and also accelerated the regeneration process in two weeks. The addition of ABA fitorregulatores with 2,4-D resulted in an increase in cell division, delaying the onset of development of plants 15 days. The H3MT-2 genotype did not respond positively to treatment and regenerationsystem used in this experiment. It has been shown in this work the optimization of in vitro regeneration of maize Hi-II genotype that can result in acceleration and efficiency of the production of genetically modified plants. The completion of the histochemical GUS assay after five days of infection allows for better access the transient transformation than after three days. For both genotypes of maize HiII and BR 451, the transfer of the T-DNA by the bacterium was enhanced by co-culture of immature embryos for five days at 20 °C, since it resulted in a higher number of blue spots per somatic embryos, 21.4 and 23.1, respectively. It was possible to transfer the bar marker gene in 0.39% of the embryos from Hi-II genotype infected with A. tumefaciens and the calli that carried the bar gene were obtained fromco-culture temperature of 20°C. It was possible to optimize transient transformation for the two genotype studied.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Aline Rezende (alinerezende@upf.br) on 2018-05-11T19:31:00Z No. of bitstreams: 1 2015DielliAparecidaDidone.pdf: 904715 bytes, checksum: 7dd97e4edf39c21e4b584807358d4f2b (MD5)eng
dc.description.provenanceMade available in DSpace on 2018-05-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015DielliAparecidaDidone.pdf: 904715 bytes, checksum: 7dd97e4edf39c21e4b584807358d4f2b (MD5) Previous issue date: 2015-03-31eng
dc.formatapplication/pdf*
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade de Passo Fundopor
dc.publisher.departmentFaculdade de Agronomia e Medicina Veterinária – FAMVpor
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.initialsUPFpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Agronomiapor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.subjectMilhopor
dc.subjectGenéticapor
dc.subjectTemperaturapor
dc.subject.cnpqCIENCIAS AGRARIAS::AGRONOMIApor
dc.titleRegeneração in vitro e condições de co-cultivo na transformação de embriões imaturos de milho via agrobacterium tumefacienspor
dc.title.alternativeIn vitro regeneration and co-culture conditions in the transformation of immature embryos of maize via agrobacterium tumefacienseng
dc.typeDissertaçãopor
Appears in Collections:Programa de Pós-Graduação em Agronomia

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