@MASTERSTHESIS{ 2015:345864905,
 	title = {Desenvolvimento e caracterização da proteína recombinante ORF2 do vírus da hepatite e genótipo 3},
 	year = {2015},
 	url = "http://10.0.217.128:8080/jspui/handle/tede/47",
 	abstract = "Hepatite E é uma doença infectocontagiosa viral causada pelo vírus da hepatite E (HEV), a qual possui destacada importância em saúde pública. Desde o seu descobrimento há 30 anos, surtos epidêmicos são associados com o consumo de águas contaminadas com o HEV, principalmente naqueles países onde o saneamento básico é deficitário ou mesmo inexistente. Por outro lado, países industrializados também notificam esta infecção e associam a mesma com o consumo de alimentos infectados com o HEV ou com viajantes que retornam de zonas endêmicas. Neste trabalho, descrevemos o desenvolvimento e a caracterização de um antígeno recombinante derivado da proteína ORF2 do HEV genótipo 3 (gt3). O RNA viral foi obtido a partir de fezes procedentes de suínos naturalmente infectados com o HEV gt3. A sequência codificante de 267 aminoácidos localizados no extremo carboxilo terminal da proteína ORF2(394-661) foi clonada dentro do vetor pET20a e expressada em Escherichia coli cepa ER2566. A sequência de aminoácidos do fragmento proteico clonado foi alinhada com diferentes sequências da proteína ORF2 do HEV gt3 isolado de humanos e de suínos, revelando uma homologia de 98%. A expressão da proteína recombinante ORF2p foi obtida mediante a indução com 0.4mM de IPTG e sua purificação, obtida mediante cromatografia líquida de proteína. O método de expressão utilizado para produzir a ORF2p foi altamente eficiente, rendendo 10 mg de proteína solúvel por litro de cultivo de E. coli. As propriedades imunogênicas da ORF2p foram avaliadas em Ratas Wistar. Em paralelo, suínos HEV negativos foram experimentalmente infectados com o HEV gt3. A proteína ORF2p demonstrou-se altamente imunogênica em ratas, rendendo altos títulos de anticorpos capazes de reconhecer o antígeno recombinante homólogo bem como a ORF2 do HEV gt3 presente nas fezes dos animais experimentalmente infectados. De forma inversa, demonstramos a capacidade dos anticorpos anti-HEV procedentes de macacos Cynomologus de reconhecer especificamente a proteína recombinante ORF2p, destacando a antigenicidade do antígeno desenvolvido. Nenhum dos leitões infectados apresentou sinais clínicos compatíveis com a doença durante o experimento ou, alterações macroscópicas durante a necropsia. Apesar do quadro clínico normal, HEV foi detectado nas fezes de 3 dos 4 leitões 14 dias após a infecção por PCR e, uma semana depois, mediante dot blot. Em conclusão, este estudo apresenta o desenvolvimento de um fragmento imunogênico da proteína ORF2 do HEV gt3, com excelentes características antigênicas, as quais convertem a ORF2p, em um candidato potencial para o desenvolvimento de ferramentas de diagnóstico para a detecção do HEV gt3 no Brasil como também, para o desenho de vacinas contra este genótipo em específico",
 	publisher = {Universidade de Passo Fundo},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Bioexperimentação},
 	note = {Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária – UPF}
}