@MASTERSTHESIS{ 2017:1431676964,
 	title = {Citometria de fluxo como ferramenta na determinação da susceptibilidade antimicrobiana},
 	year = {2017},
 	url = "http://tede.upf.br:8080/jspui/handle/tede/1726",
 	abstract = "A resistência antimicrobiana é uma preocupação constante. Para evitar o surgimento de novas cepas bacterianas multirresistentes é necessário investir em pesquisas e tecnologias de avaliação da atividade antimicrobiana. Diversos métodos laboratoriais estão disponíveis para avaliação da susceptibilidade antimicrobiana in vitro, permitindo a escolha terapêutica correta em aproximadamente 20 h após cultura positiva. Nesse contexto, o desenvolvimento de novas metodologias para avaliar o perfil de susceptibilidade antimicrobiana, de forma rápida e precisa, irá contribuir para a utilização racional dos fármacos e, consequente, redução e/ou controle da resistência bacteriana, e aumento na sobrevida dos pacientes. O objetivo do nosso trabalho foi desenvolver um protocolo rápido de determinação de susceptibilidade aos antimicrobianos por meio da técnica de citometria de fluxo. Para padronização desse procedimento utilizamos 6 antimicrobianos, uma cepa bacteriana de Escherichia coli (ATCC 25922) sensível a todos os antimicrobianos, além de isolados clínicos de E. coli resistentes aos mesmos antimicrobianos. Os isolados foram submetidos previamente ao método de disco-difusão para avaliação do perfil de susceptibilidade. As cepas selecionadas foram cultivadas em caldo LB, lavadas e quantificadas por citometria de fluxo. Concentrações padrões dos antimicrobianos foram adicionadas à 104 E.coli e incubadas por 1, 2 ou 3 h à 37°C. Em seguida, as amostras foram marcadas com iodeto de propídeo (PI) e analisadas por citometria de fluxo. A determinação da viabilidade bacteriana baseou-se no conceito de que o marcador de ácido nucléico PI é capaz de penetrar membranas celulares danificadas, marcando o DNA celular e assim, diferenciando as populações viáveis e inviáveis. Para validação da técnica, cada amostra, em seus respectivos tempos de tratamento foram submetidas também a contagem bacteriana por meio de plaqueamento em meio LB, e a taxa de sobrevivência/crescimento foi determinada após incubação à 36°C por 18-24 h. A utilização da técnica de citometria de fluxo permitiu avaliar a susceptibilidade antimicrobiana em poucas horas. Porém ao compararmos a técnica com a contagem em placas, não foi possível estabelecer uma correlação positiva, pois a citometria apresentou um percentual de viabilidade superior ao método tradicional. Isso pode ser explicado pela presença de subpopulações viáveis, porém não cultiváveis, incapazes de formar colônias em ágar. Por outro lado, se considerarmos os isolados resistentes, a citometria de fluxo possibilitou determinar a resistência antimicrobiana com precisão, fator determinante para o sucesso no tratamento de infecções por microrganismos multirresistentes. A citometria de fluxo pode ser aprimorada como uma alternativa na detecção de cepas multirresistentes.",
 	publisher = {Universidade de Passo Fundo},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Bioexperimentação},
 	note = {Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária – FAMV}
}